PCR دیجیتال برای EGFR T790M و C797S: ردیابی مقاومت توالی پس از درمان TKI

مرور کلی

مقاومت به درمان EGFR به ترتیب قابل پیش بینی است و این آزمایش در اطراف آن دنباله ساخته شده است. T790M به طور کلاسیک تحت فشار مهار کننده نسل قبلی ظاهر می شود،در حالی که C797S بعد از استفاده از یک عامل نسل سوم علیه T790M ظاهر می شودهدف قرار دادن هر دو جایگزینی در یک واکنش بسیار حساس باعث می شود که یک تصور کلینیکی مبهم از پیشرفت به مکانیسم فرار نامگذاری شده تبدیل شود.

چگونه کار می کند

پی سی آر دیجیتال یک نمونه آماده شده را در هزاران قسمت مستقل قبل از شروع تقویت تقسیم می کند. هر قسمت یا یک مولکول هدف دارد یا ندارد،پس بعد از دوچرخه سواری، ابزار بخش های مثبت را می شمارد و آمار پوسون را برای بدست آوردن تعداد مولکول های مطلق بدون مراجعه به یک منحنی استاندارد اعمال می کند..بررسي هاي خاص آليلي، توطئه جهش يافته را از پس زمینه هاي بيشتري از نوع وحشي متمایز مي کنند. اين تقسيم است که اجازه مي دهد آليلي مقاوم نادر در برابر بيشترين دي ان اي طبيعيکه مهمه چون کلون هاي فرار اغلب يک بخش کوچيک از مواد در حال گردش را در زماني که پيشرفت از نظر باليني قابل مشاهده ميشه نشان ميدهند.

نشانه ها

این آزمایش برای بیمارانی مناسب است که در درمان های هدایت شده توسط EGFR پیشرفت می کنند، جایی که مکانیسم فرار باید قبل از انتخاب خط بعدی نامگذاری شود. پلاسما ماتریس معمول است، زمانی که بیوپسی مجدد غیر عملی است.و بافت می تواند مورد استفاده قرار گیرد در صورتی که یک نمونه تازه به دست آید.همچنین از نمونه گیری سریال در طول درمان پشتیبانی می کند، زیرا یک شمارش مطلق اجازه می دهد تا مقایسه بین کشش ها به جای یک عکس واحد انجام شود. یک نتیجه پلاسما منفی مقاومت را رد نمی کند،چون تخليه متفاوت استبنابراین تایید بافت در صورتی که تصویر بالینی متفاوت باشد، مناسب است.

مشخصات و گزارش

حجم خون مورد نیاز را تایید کنید، حد تشخیص به عنوان یک کسری آلل جهش یافته و تعداد کپی های DNA مورد پرسش در هر واکنش، به عنوان یک ورودی کم به طور ساکت حساسیت را کاهش می دهد.گزارش ها باید تعداد مطلق جهش یافته و نوع وحشی را در کنار کسری، هر جایگزینی را به طور جداگانه نامگذاری کنید و ثبت کنید که آیا ورودی کمتر از آستانه تأیید شده است.

ذخیره سازی و منابع

کار پلاسما بر اساس ساعت کنترل می شود. خون گرفته شده از لوله های استاندارد EDTA باید در یک پنجره کوتاه و مشخص جدا شود، در حال انتقال در 2 تا 8 درجه سانتیگراد نگه داشته شود.از آنجا که تجزیه سلول های سفید، نمونه را با DNA نوع وحشی غرق می کند و سیگنال را دفن می کند.لوله هاي ثبات بخش سلول اين پنجره را تمديد مي کنند و ارزشش را دارند در شبکه هاي جمع آوری پراکنده پلاسمای جدا شده در يخچال نگهداری می شود.برنامه های نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه ی نامه.

سوالات عمومی

س: چرا در صورت مشکوک بودن به مقاومت، PCR دیجیتال را به جای یک پانل توالی گسترده انتخاب کنید؟هنگامی که سوال این است که آیا یک جایگزینی شناخته شده وجود دارد، شمارش پارتیشن به یک محدودیت تشخیص پایین تر می رسد و سریعتر از توالی گسترده باز می گردد.در عوض، یک صفحه گسترده انتخاب کنید وقتی که مسیر فرار واقعا ناشناخته است.

س: یافته C797S برای خط بعدی درمان چه معنایی دارد؟این نشان می دهد که فرار در محل اتصال که توسط مهار کننده های نسل سوم هدف قرار گرفته است رخ داده است، بنابراین ادامه همان عامل به احتمال زیاد کمک نمی کند.نتیجه باید با توجه به دستورالعمل های درمان فعلی مورد بحث قرار گیرد نه به عنوان دستورالعمل تجویز شده..

س: پلاسما باید چقدر سریع به آزمایشگاه برسد تا DNA در گردش باقی بماند؟با جمع آوری استاندارد EDTA، فاصله از کشیدن تا جداسازی در ساعت ها اندازه گیری می شود، نه در روزها.پنجره ذکر شده ارائه دهنده را تأیید کنید و قبل از تعهد به سایت های جمع آوری به گردش کار، کوری خود را با آن تأیید کنید.